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    太原正規外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

    發(fā)布時(shí)間:2024-06-21 01:04:05   來(lái)源:太倉祥高機電有限公司   閱覽次數:48624次   

    外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗,難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現在也被用來(lái)沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì )破壞外泌體等利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái)。太原正規外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

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    外泌體研究的主要應用:外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細胞類(lèi)型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來(lái)源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進(jìn)了一些病癥的生長(cháng)與侵襲。一些病癥。一些病癥轉移。來(lái)自白血病干細胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML)細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來(lái)沉默KRASG12D,從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉移過(guò)程。免疫。β細胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細胞外,并可轉移到其他代謝部位或免疫內皮細胞,有利于維持葡萄糖體內平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉移到內皮細胞導致了內皮細胞的損傷促進(jìn)動(dòng)脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類(lèi)性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發(fā)現循環(huán)EVs的水平上升合肥正規外泌體提取試劑廠(chǎng)家由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì)。

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    研究中研究人員發(fā)現,胃病細胞周?chē)缓琓AM。TAM以M2極化表型為特征,并促進(jìn)胃病細胞在體外和體內的遷移。此外,研究人員發(fā)現M2衍生的外泌體決定了TAMs介導的遷移活動(dòng)。通過(guò)使用質(zhì)譜方法,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì)。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來(lái)源于M2外泌體的蛋白質(zhì),是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅動(dòng)因素。然而,來(lái)自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內對胃病細胞的遷移沒(méi)有顯著(zhù)影響。在機制上,M2巨噬細胞衍生的外泌體介導ApoE啟動(dòng)的PI3K-Akt信號通路,并在TAM和受體胃病細胞之間進(jìn)行細胞間轉移,促進(jìn)細胞骨架的遷移??偟膩?lái)說(shuō),該研究發(fā)現外泌體介導的功能性ApoE蛋白從TAM轉移到一些病癥細胞,促進(jìn)了胃病細胞的遷移。

    外泌體與肺病預后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時(shí)發(fā)現,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著(zhù)上升。此外,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現,NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著(zhù)影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調,進(jìn)一步研究發(fā)現,let-7f和miR-30e-3p水平可以區分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預后密切相關(guān)。外泌體提?。狠^常見(jiàn)的過(guò)濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑。

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    外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。其主要來(lái)源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F已證實(shí)可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹(shù)突狀細胞、瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長(cháng)與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著(zhù)重要的作用。同時(shí),不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來(lái)完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發(fā)生分為三類(lèi),包括外泌體、微泡和凋亡小體。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀。太原正規外泌體提取試劑直銷(xiāo)廠(chǎng)家

    外泌體提?。好庖叻蛛x技術(shù)。太原正規外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

    具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進(jìn)行,1、300×g10min,棄沉淀,去除細胞2、2000×g20min,棄沉淀,去除死細胞3、10,000×g30min,棄沉淀,去除細胞碎片等亞細胞成分4、10,000×g70min,棄上清,沉淀即為外泌體5、PBS(每10ml細胞培養液用30mlPBS重懸)清洗沉淀物,混勻,10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀(外泌體),立即使用或置于-80℃備用。7、一般超速離心法會(huì )結合密度梯度離心,這樣得到的外泌體更純,具體做法第4步后蔗糖梯度離心,10,000×g70min,以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點(diǎn)是:成本低,操作簡(jiǎn)單,獲得的囊泡數較多。缺點(diǎn)是:耗時(shí)耗力(需用時(shí)8-30h,并且每次只能處理6個(gè)樣本),獲得的外泌體純度不是很高,高速及重復離心也會(huì )對外泌體產(chǎn)生很大的傷害,并且不適用于如血漿和血清等粘性液體生物樣本。太原正規外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

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